Narodila se z manželství krále Jana s kastilskou infantkou Kateřinou. Kateřina vyrostla u své matky kastilské královny Jany I., vězněné za zdmi Tordesillasu, a v necelých osmnácti letech se provdala za třiadvacetiletého portugalského krále Jana III. O rok později se provdala Janova sestra Isabela za Kateřinina bratra Karla V.
Marie měla sedm sourozenců, ale kromě bratra Jana všichni zemřeli v dětském věku.
15. listopadu1543 se provdala za svého o rok staršího bratrance (1. stupně) Filipa. Zemřela v sedmnácti letech, v roce 1545 čtyři dny po porodu syna a následníka Karla.
Regina Sasko-Meiningenská • Markéta Savojská-Aosta*** • Anna Eugénie Arenbergová • Yolanda z Ligne • Xenia Czernicheva-Besobrasova • Anna Gabriela z Wrede • Helena z Toerring-Jettenbach • Ludmila z Gallen • Laetitia z Arenbergu** • Margaret Kálnoky von Köröspatak** • Maria Espinosa de los Monteros** • Valerie z Podstatzky-Lichtenstein** • Freiin Eva Antonia von Hofmann** • Anna Amelie ze Schönburg-Waldenburg** • Hedvika z Lichem-Löwenburg** • Freiin Edith von Sternbach** • Margarite z Hohenbergu • Marie Christine von Hatzfeldt-Dönhoff • Eugenia de Calonge • Freiin Maria Theresia von Gudenus
* také španělská infanta sňatkem, ** také toskánská princezna sňatkem, *** také modenská princezna sňatkem