ELISA

Z Wikipedie, otevřené encyklopedie
Skočit na: Navigace, Hledání

ELISA (z angl. Enzyme-Linked ImmunoSorbent Assay), někdy také označovaná jako EIA (Enzyme Immunoassay) je jednou z nejpoužívanějších imunologických metod sloužících k detekci protilátek. Metoda funguje na bázi imunoenzymatické reakce a lze s ní rovněž detekovat i antigen. ELISA využívá dvou základních vlastností imunoglobulinů. Za prvé je to schopnost proteinů (tedy imunoglobulinů) vázat se na povrch plastů (např. polystyrenu) a v druhé řadě pak schopnost vázat enzymy na Fc fragmenty (viz protilátka) imunoglobulinových molekul.

Pro průkaz specifických protilátek i antigenů existuje široké spektrum různých modifikací ELISA testu:

  • Přímá ELISA - pro detekci antigenu.
  • Nepřímá ELISA - pro deteci specifických protilátek.
  • Přímá sendvičová ELISA - pro detekci antigenu.
  • Nepřímá sendvičová ELISA - pro deteci specifických protilátek.

Základní složky ELISA testu[editovat | editovat zdroj]

Klasická 96-jamková destička pro metodu ELISA
  1. Antigen
    • detekovaný v testovaném vzorku
    • známý, komerčně připravovaný
  2. Protilátka
    • detekovaná v testovaném séru
    • známá, komerčně připravovaná
  3. Konjugát
    • jedná se opět o protilátku proti protilátce (konkrétně proti druhově specifickým imunoglobulinům příslušného izotypu (proti IgG, IgM, IgA, viz protilátka), na kterou je navázaný enzym (konjugovaná enzymem)
  4. Substrát
    • je chemická látka, která reaguje s enzymem a tím změní svou barvu

Praktické použití[editovat | editovat zdroj]

Metody ELISA se využívají k diagnostice infekčních nemocí člověka a zvířat. Stanovují se buď protilátky proti konkrétnímu patogenu nebo se detekují přímo prionové, virové, bakteriální, parazitární antigeny. Dále se používají k detekci některých toxinů, hormonů, celé řady proteinů, případně dalších bioaktivních látek. Vědci pracují i na vývoji metod ELISA pro kosmický výzkum, například k detekci forem života na Marsu.

Bibliografie[editovat | editovat zdroj]

  • Toman M. a kol.: Veterinární imunologie. Grada Publishing, Praha, 2000.
  • Tijssen P.: Practice and Theory of Enzyme Immunoassays. Elsevier, Amsterdam, 1985.
  • Tizard, I.R.: Veterinary Immunology - an introduction. Saunders co., Philadelphia, 1996.