Phospho Flow
Phospho Flow (Phospho-Specific Flow Cytometry) je analytická metoda využívaná hlavně v biologii. Konkrétně se jedná o typ průtokové cytometrie, který kombinuje základní charakteristiky cytometrického měření buněčných znaků (CD markery) spolu s analýzou fosforylace proteinů.
Příprava vzorku a měření[editovat | editovat zdroj]
Pro úspěšnou analýzu fosforylace proteinů je nutná jejich fixace ve stavu, v jakém se nacházejí v buňce. K fixaci se využívají denaturační činidla jako např. formaldehyd. Dále je nutné buňky permeabilizovat a konjugovat specifické fluorescenčně značené protilátky na fosforylované proteiny.[1]
Využití[editovat | editovat zdroj]
V případě použití multiparametrické analýzy lze tedy např. sledovat různé subpopulace T lymfocytů (CD4+, CD8+, naivní, paměťové) a rozdíly v signalizaci mezi těmito subsety.[2] Také lze sledovat fosforylaci v rámci signálních drah u rakovinných buněk, která je v porovnání s nemaligními liniemi často rozdílná. Běžněji se tato technika využívá u hematologických malignit, ale lze ji aplikovat i na solidní tumory.[3]
Také je možné pomocí Phospho Flow sledovat farmakodynamiku imunosupresivní léčby u pacientů po transplantaci, což může sloužit k lepší personalizaci léčby.[4]
Reference[editovat | editovat zdroj]
- ↑ WU, Sheng; JIN, Lei; VENCE, Luis. Development and application of ‘phosphoflow’ as a tool for immunomonitoring. Expert review of vaccines. 2010-6, roč. 9, čís. 6, s. 631–643. PMID: 20518718 PMCID: PMC2933839. Dostupné online [cit. 2018-05-16]. ISSN 1476-0584. DOI 10.1586/erv.10.59. PMID 20518718.
- ↑ GOLDECK, David; LOW, Ivy; SHADAN, Nurhidaya Binte. Multi-parametric phospho-flow cytometry: A crucial tool for T lymphocyte signaling studies. Cytometry Part A. 2013-01-28, roč. 83A, čís. 3, s. 265–272. Dostupné online [cit. 2018-05-16]. ISSN 1552-4922. DOI 10.1002/cyto.a.22252. (anglicky)
- ↑ LIN, Chien-Chung; HUANG, Wei-Lun; SU, Wen-Pin. Single cell phospho-specific flow cytometry can detect dynamic changes of phospho-Stat1 level in lung cancer cells. Cytometry Part A. 2010-09-02, roč. 77A, čís. 11, s. 1008–1019. Dostupné online [cit. 2018-05-16]. ISSN 1552-4922. DOI 10.1002/cyto.a.20965. (anglicky)
- ↑ BAAN, Carla; BOUVY, Anne; VAFADARI, Ramin. Phospho-specific flow cytometry for pharmacodynamic monitoring of immunosuppressive therapy in transplantation. Transplantation Research. 2012-11-16, roč. 1, s. 20. Dostupné online [cit. 2018-05-16]. ISSN 2047-1440. DOI 10.1186/2047-1440-1-20. PMID 23369224.