EuroFlow

Z Wikipedie, otevřené encyklopedie
Skočit na: Navigace, Hledání

EuroFlow asociace byla založena v roce 2005 jako EU-FP6 financovaný projekt, který byl odstartován na jaře roku 2006. Zpočátku bylo Euroflow tvořeno 18 dignostickými výzkumnými skupinami a dvěma SME (anglicky Small an Medium Enterprises, česky Malé a střední podniky), celkově z 8 různých evropských zemí, se vzájemně se doplňujícími znalostmi na poli průtokové cytometrie a imunofenotypizace leukémií. Během roku 2012 obě SME projekt opustily a EuroFlow tak zanechaly plně vědecky nezávislým. Cílem EuroFlow je inovace a standardizace průtokové cytometrie tak, aby došlo ke zlepšení a pokroku při diagnóze a individualizaci léčby pacientů trpících zhoubnými nádorovými onemocněními krevního původu (dále hematologické malignity, například leukémie a lymfomy).

Historie[editovat | editovat zdroj]

Od 90. let se imunofenotypizace pomocí protilátek konjugovaných s fluorochromy a jejich následná detekce průtokovým cytometrem stala preferovanou metodou při diagnóze hematologických malignit. Výhodou této metody je rychlost a nenáročnost a také možnost detekovat vice jak 6 parametrů současně, dále také široká aplikovatelnost v lékařské diagnostice a přesné zaměření na nádorové populace. Vzhledem k rychlému vývoji nových protilátek, fluorochromů a mnohobarevných digitálních cytometrů se stalo důležitou otázkou, jak cytometrická data správně interpretovat a jak dosáhnout standardizovaných a srovnatelných výsledků mezi laboratořemi. I přesto, že byl zaveden jistý konsensus doporučení a směrnic, jednalo se jen o částečnou standardizaci, nebral se ohled na různé zdroje reagencií (hlavně klony protilátek, fluorochromy a jejich optimální kombinace) nebo na postup přípravy vzorků. Vzhledem k těmto mezilaboratorním rozdílům je cytometrie vnímána jako metoda vysoce závislá na odbornosti s limitovanou reprodukovatelností při studiích probíhajích ve více centrech.

Cíle Euroflow[editovat | editovat zdroj]

  • Vývoj a validace nových protilátek
  • Zavedení nové technologie založené na kuličkových testech (sendvičové imunostanovení na kuličkách)
  • Vývoj nových softwarových nástrojů a z toho plynoucí nové analytické přístupy pro rozpoznávání komplexních imunofenotypových vzorců
  • Design nových vícebarevných protokolů a standardních operačních procedur (SOP)
  • Vývoj a standardizace rychlé, přesné a vysoce citlivé průtokové cytometrie[1]

Dosažené cíle[editovat | editovat zdroj]

Během uplynulých let dosáhlo EuroFlow většiny svých cílů. Ustanovilo osmibarevné panely protilátek pro diagnostiku, klasifikaci a následné kontrolní vyšetření hematologických malignit[2]. Panely jsou tvořeny testovací zkumavkou a několika doplňujícími charakterizačními zkumavkami a jsou založeny na zkušenostech a literatuře. Jsou i nadále optimalizovány a rozsáhle testovány na velkých souborech vzorků paralelně v několika výzkumných centrech konsorcia EuroFlow. Proběhla selekce fluorochromů i standardizace nastavení přístroje a laboratorních protokolů, tedy celkový vývoj standardizovaných operačních procedur[3]. Klony protilátek a fluorochromy a další reagencie od různých výrobců byly podstoupeny detailnímu testování a srovnání. Zároveň byl pro analýzu těchto obsáhlých a komplexních dat vyvinutý software schopný multidimenzionálního statistického srovnávání dat normálních vzorků (zdravých kontrol) se vzorky pacientů[4][5]. Dále byly vyvinuté nové klony protilátek proti pečlivě vybraným epitopům fúzních proteinů, které jsou typické pro chromozomální translokace (detekce nejfrekventovanějších fúzních proteinů) při akutních leukémiích a chronické myeloidní leukémie a byla zavedená detekce fúzních proteinů pomocí kuličkových testů[6][7][8]

Odkazy[editovat | editovat zdroj]

Reference[editovat | editovat zdroj]

  1. VAN DONGEN, J. J.; ORFAO, A.. EuroFlow: Resetting leukemia and lymphoma immunophenotyping. Basis for companion diagnostics and personalized medicine. Leukemia.. 2012, roč. 26, čís. 9, s. 1899-907. Dostupné online. ISSN 1476-5551.  
  2. VAN DONGEN, J. J.; LHERMITTE, L.; BÖTTCHER, S., et al. EuroFlow antibody panels for standardized n-dimensional flow cytometric immunophenotyping of normal, reactive and malignant leukocytes. Leukemia.. 2012, roč. 26, čís. 9, s. 1908-75. Dostupné online. ISSN 1476-5551.  
  3. KALINA, T.; FLORES-MONTERO, J.; VAN DER VELDEN, V. H., et al. EuroFlow standardization of flow cytometer instrument settings and immunophenotyping protocols. Leukemia.. 2012, roč. 26, čís. 9, s. 1986-2010. Dostupné online. ISSN 1476-5551.  
  4. PEDREIRA, C. E.; COSTA, E. S.; BARRENA, S., et al. Generation of flow cytometry data files with a potentially infinite number of dimensions. Cytometry A.. 2008, roč. 73, čís. 9, s. 834-46. Dostupné online. ISSN 1552-4930.  
  5. COSTA, E. S.; PEDREIRA, C. E.; BARRENA, S., et al. Automated pattern-guided principal component analysis vs expert-based immunophenotypic classification of B-cell chronic lymphoproliferative disorders: a step forward in the standardization of clinical immunophenotyping. Leukemia.. 2010, roč. 24, čís. 11, s. 1927-33. Dostupné online. ISSN 1476-5551.  
  6. DEKKING, E.; VAN DER VELDEN, V. H.; BÖTTCHER, S., et al. Detection of fusion genes at the protein level in leukemia patients via the flow cytometric immunobead assay. Best Pract Res Clin Haematol.. 2010, roč. 23, čís. 3, s. 333-45. Dostupné online. ISSN 1532-1924.  
  7. DEKKING, E. H.; VAN DER VELDEN, V. H.; VARRO, R., et al. Flow cytometric immunobead assay for fast and easy detection of PML-RARA fusion proteins for the diagnosis of acute promyelocytic leukemia. Leukemia.. 2012, roč. 26, čís. 9, s. 1976-85. Dostupné online. ISSN 1476-5551.  
  8. WEERKAMP, F.; DEKKING, E.; NG, Y. Y., et al. Flow cytometric immunobead assay for the detection of BCR-ABL fusion proteins in leukemia patients. Leukemia.. 2009, roč. 23, čís. 6, s. 1106-17. Dostupné online. ISSN 1476-5551.  

Externí odkazy[editovat | editovat zdroj]