Buněčná linie KBM-7
Buněčná linie KBM-7 je imortalizovaná lidská buněčná linie chronické myeloidní leukémie (CML). Stala se důležitým nástrojem v oblasti výzkumu CML a souvisejících cytogenetických a molekulárních změn. KBM-7 byla izolována a charakterizována v několika studiích, které přinesly důležité poznatky o této buněčné linii.
Historie
[editovat | editovat zdroj]Buněčná linie KBM-7 byla poprvé izolována v roce 1987 od 39letého muže s chronickou myeloidní leukémií v blastické krizi, u kterého se v průběhu nemoci vyskytla transformace k near-haploidnímu chromozomovému vzoru[1]. Analýza genomu odhalila, že kromě disomického chromozomu 8 je ve dvou kopiích přítomen 30megabázový fragment chromozomu 15[2]. Později byla tato linie také izolována a charakterizována jako buněčná linie s dvojitými Philadelphia chromozomy, což je typická cytogenetická abnormalita spojená s CML. V KBM-7 byly detekovány také nedostatky v normálních transkriptech c-ABL a BCR, které jsou obvykle přítomny v buňkách s Philadelphia chromozomy[3].
Charakteristika
[editovat | editovat zdroj]Buněčná linie KBM-7 je známá svou near-haploidní povahou, což znamená, že obsahuje téměř polovinu normálního chromozomového obsahu[1].
Na genetické úrovni byly v KBM-7 buňkách identifikovány dvojité Philadelphia chromozomy, které jsou typické pro CML. Tato cytogenetická abnormalita vede ke vzniku fúzního proteinu BCR-ABL. Fúzní protein BCR-ABL je aktivní tyrosinkináza, která nesprávně reguluje buněčný růst a přežívání, což je charakteristické pro CML.
Další molekulární charakteristikou KBM-7 je nedostatek normálních transkriptů c-ABL a BCR. C-ABL gen je důležitý pro regulaci buněčného cyklu, signalizaci a opravu DNA. BCR gen je zapojen do normální funkce lymfocytů a regulace signálních drah. V KBM-7 buňkách je porucha těchto transkriptů spojena s patologickými důsledky a přispívá k onkogenetickému potenciálu této buněčné linie.[3]
KBM-7 buňky jsou také využívány v proteogenomické analýze ke studiu chybějících proteinů v haploidních buněčných liniích.[4]
Význam
[editovat | editovat zdroj]Buněčná linie KBM-7 poskytuje vědcům cenný model pro studium chronické myeloidní leukémie a souvisejících cytogenetických a molekulárních změn. Výzkum na této buněčné linii pomáhá lépe porozumět patogenezi CML a objevovat nové terapeutické přístupy.[1][3] Studie také ukázaly, že látky jako karneosová kyselina mohou ovlivňovat buněčnou proliferaci a invazi v KBM-7 buňkách prostřednictvím regulace mikroRNA-708[5].
Buněčná linie KBM-7 je významným nástrojem pro studium chromozomálních změn, proteomiky a molekulárních mechanismů spojených s chronickou myeloidní leukémií. Její využití v laboratořích přispívá k pokroku v diagnostice a léčbě této onemocnění.[1][3]
Kultivace
[editovat | editovat zdroj]Buněčná linie KBM-7 se obvykle kultivuje ve specifických podmínkách, které umožňují optimální růst a udržení buněk ve vhodném stavu pro výzkumné účely. Pro kultivaci se používá médium Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 1640 obohacené živnými látkami a doplněné 10-20% fetal bovine serum (FBS). Buněčná linie se kultivuje ve sterilních kultivačních miskách nebo sklenicích s povrchovou úpravou, která zlepšuje přilnavost buněk. Hustota buněk pro kultivaci se často pohybuje v rozmezí 1–2 * 105 buněk/ml[6].
KBM-7 buňky se udržují při teplotě 37 °C ve vlhké atmosféře s koncentrací 5% CO2, což je optimální prostředí pro jejich růst a přežívání[7].
Reference
[editovat | editovat zdroj]- ↑ a b c d ANDERSSON, Borje S.; BERAN, Miloslav; PATHAK, Sen. Ph-positive chronic myeloid leukemia with near-haploid conversion in vivo and establishment of a continuously growing cell line with similar cytogenetic pattern. Cancer Genetics and Cytogenetics. 1987-02, roč. 24, čís. 2, s. 335–343. Dostupné online [cit. 2023-06-11]. DOI 10.1016/0165-4608(87)90116-6. (anglicky)
- ↑ BÜRCKSTÜMMER, Tilmann; BANNING, Carina; HAINZL, Philipp. A reversible gene trap collection empowers haploid genetics in human cells. Nature Methods. 2013-10, roč. 10, čís. 10, s. 965–971. Dostupné online [cit. 2023-06-11]. ISSN 1548-7091. DOI 10.1038/nmeth.2609. PMID 24161985. (anglicky)
- ↑ a b c d ANDERSSON, B. S.; COLLINS, V. P.; KURZROCK, R. KBM-7, a human myeloid leukemia cell line with double Philadelphia chromosomes lacking normal c-ABL and BCR transcripts. Leukemia. 1995-12, roč. 9, čís. 12, s. 2100–2108. PMID: 8609723. Dostupné online [cit. 2023-06-11]. ISSN 0887-6924. PMID 8609723.
- ↑ LEE, Seung-Eun; SONG, JongKeon; BÖSL, Korbinian. Proteogenomic Analysis to Identify Missing Proteins from Haploid Cell Lines. PROTEOMICS. 2018-04, roč. 18, čís. 8, s. 1700386. Dostupné online [cit. 2023-06-11]. DOI 10.1002/pmic.201700386. (anglicky)
- ↑ Liu, D., Wang, B., Zhu, Y., Yan, F., & Dong, W. (2018). Carnosic acid regulates cell proliferation and invasion in chronic myeloid leukemia cancer cells via suppressing microRNA-708. J. BUON, 23(3), 741-746
- ↑ KOTECKI, M. Isolation and Characterization of a Near-Haploid Human Cell Line. Experimental Cell Research. 1999-11-01, roč. 252, čís. 2, s. 273–280. Dostupné online [cit. 2023-06-11]. DOI 10.1006/excr.1999.4656. (anglicky)
- ↑ DUNCAN, Lidia M.; TIMMS, Richard T.; ZAVODSZKY, Eszter. Fluorescence-Based Phenotypic Selection Allows Forward Genetic Screens in Haploid Human Cells. PLoS ONE. 2012-06-22, roč. 7, čís. 6, s. e39651. Dostupné online [cit. 2023-06-11]. ISSN 1932-6203. DOI 10.1371/journal.pone.0039651. PMID 22745803. (anglicky)